液氮冷凍保藏技術(shù)

近年來，很多有特殊意義和特征的動(dòng)、植物細(xì)胞能夠在液氮中保藏，并發(fā)現(xiàn)在液氮中保藏的菌種的存活率遠(yuǎn)比其他保藏辦法高且回復(fù)突變的發(fā)生率極低。

液氮罐廠家了解液氮保藏巳成為工業(yè)微生物菌種保藏的*好辦法。（而讓液氮保持效果，便于運(yùn)輸，儲(chǔ)存離不開液氮罐）具體辦法是：把細(xì)胞懸浮于必定的分散劑中或是把在瓊脂培育基上培育好的菌種直接進(jìn)行液體冷凍，然后移至液氮(-196 ℃)或其蒸汽相中(-l56 ℃)保藏。

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進(jìn)行液氮冷凍保藏時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制致冷速度。

液氮冷凍保藏微生物菌種的過程是先制備冷凍保藏菌種的細(xì)胞懸液，分裝0.5～1 mL入玻璃安瓿或液氮冷藏塑料瓶，玻璃安瓿用酒精噴燈封口。 然后以(1-2) ℃/min的致冷速度降溫，直到溫度到達(dá)相對溫度之上幾度的細(xì)胞凍結(jié)點(diǎn)(通常為-30 ℃)。

待細(xì)胞凍結(jié)后，將致冷速度降為1 ℃/min，直到溫度到達(dá)-50 ℃，將安瓿迅速移入液氮罐中于液相(-196 ℃)或氣相(-156 ℃)中保存。如果無控速冷凍機(jī)，則一般可用如下辦法替代：

將安瓿或液氮瓶置于-70 ℃冰箱中冷凍4 h，然后迅速移入液氮罐中保存。在液氮冷凍保藏中，*常用的冷凍保護(hù)劑是二甲亞砜和甘油，*終運(yùn)用濃度一般為甘油10 %、二甲亞砜5 %。

所運(yùn)用的甘油一般用高壓蒸汽滅菌，而二甲亞砜*好為過濾滅菌。